Подтверждение компетентности референтной лаборатории по АЧС ФГБУ «ВНИИЗЖ» в международных сличительных испытаниях в 2019 году

Ежегодно Справочная лаборатория по африканской чуме свиней (CISA-INIA, Мадрид, Испания, EURL) Европейского Союза (ЕС) организует проведение сличительных испытаний по диагностике АЧС для проверки компетенции и уровня подготовки специалистов диагностических лабораторий ЕС и других заинтересованных стран.

В 2019 году референтная лаборатория по АЧС подведомственного Россельхознадзору ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ID 45) пятый год подряд приняла участие в данных сличительных испытаниях. Для проведения исследований ФГБУ «ВНИИЗЖ» было получено две панели шифрованных образцов проб (сыворотка крови свиней (S1-S14) и суспензия органов (T1-T6)) для выявления антител и генома вируса АЧС используемыми в лаборатории методами. Следует отметить, что для проведения испытаний EURL были представлены пробы, отобранные в различные сроки после заражения, от животных, имеющих различные формы течения заболевания: острая, подострая, субклиническая и хроническая. А также заражённых вирусом АЧС различной степени вирулентности и генотиповой принадлежности.

При проведении испытаний по выявлению генома вируса АЧС методом полимеразной цепной реакции сотрудники лаборатории использовали ПЦР в режиме реального времени (ARRIAH KIT), разработанную в референтной лаборатории ФГБУ «ВНИИЗЖ», и коммерческую тест-систему для диагностики АЧС методом ПЦР в режиме реального времени (Interlabservice ASF kit). Исследованию подлежали 14 образцов сыворотки и 6 образцов патологического материала от инфицированных и неинфицированных свиней (рис.1а и 1 b).

Рисунок 1а.

Примечание: POS – положительный результат; NEG – отрицательный результат; WEAK – слабоположительный результат

Рисунок 1b.

Примечание: POS – положительный результат; NEG – отрицательный результат

Результаты исследований специалистов ФГБУ «ВНИИЗЖ» показали, что в 4 пробах сыворотки крови (S5, S6, S10 и S11) и 4 пробах патологического материала (T1, T3, Т5 и Т6) присутствует геном (ДНК) вируса АЧС.

При исследовании сывороток крови методом иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием тест-системы для выявления антител «Ingenasa K3» (пр-ль Ingenasa, Испания) и экспериментальной тест системы ФГБУ «ВНИИЗЖ», разработанной на основе комплексного антигена, получены следующие результаты (рис. 2а). Подтверждение результатов проводилось рекомендованным МЭБ методом иммуноблотинга, а также методом непрямой иммунофлуоресценции. (рис. 2b):

Рисунок 2а.

Примечание: POS – положительный результат; NEG – отрицательный результат

В результате исследований специалисты ВНИИЗЖ определили, что в 7 образцах сывороток (S2, S3, S6, S7, S8, S13 и S14) присутствуют специфические антитела к вирусу АЧС. Результаты иммуноблотинга и непрямой иммунофлуоресценции, как наиболее специфичных и чувствительных методов, подтвердили эти результаты (рис. 2b).

Рисунок 2b.

Примечание: POS – положительный результат; NEG – отрицательный результат; WEAK – слабоположительный результат, doubt – сомнительный результат

Таким образом, по результатам комплекса различных методов исследований, используемых в референтной лаборатории по АЧС ФГБУ «ВНИИЗЖ», российские специалисты успешно прошли сличительные испытания, правильно поставив диагноз для всех зашифрованных образцов (результаты подтверждены/расшифрованы EURL в финальном отчете), тем самым подтвердив свою высокую методическую грамотность и квалификацию (рис 3).

Рисунок 3.

Примечание: POS – положительный результат; NEG – отрицательный результат; WEAK – слабоположительный результат

В своем финальном отчете специалисты EURL высоко оценили квалификацию сотрудников, диагностические наборы и тест-системы, используемые для диагностики в референтной лабораторией по АЧС ФГБУ «ВНИИЗЖ»: «Для каждого зашифрованного образца был дан правильный результат, в соответствии с нашими ожиданиями. На основании данных результатов, Справочная лаборатория ЕС установила, что диагностические процедуры, используемые в вашей лаборатории соответствуют необходимому уровню для проведения диагностики полевого материала».

Положительные результаты использования в испытаниях, разработанных в ФГБУ «ВНИИЗЖ» диагностических тест-систем для диагностики африканской чумы свиней методом (ПЦР и ИФА), подтвердило перспективность их внедрения в лабораторную практику ветеринарных учреждений Российской Федерации.

Пресс-служба ФГБУ «ВНИИЗЖ»